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講解如何使用DNA合成儀合成亞磷酰胺寡核苷酸

更新時(shí)間:2022-03-09      點(diǎn)擊次數(shù):1076
   DNA合成儀就是用于和DNA或RNA結(jié)構(gòu)類似的寡核苷酸合成的自動(dòng)化儀器,通常用于固相合成法,每次在長(zhǎng)的寡核苷酸鏈上接入一個(gè)核苷酸。加入每一個(gè)核苷酸均通過(guò)相同的化學(xué)反應(yīng)和相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。

  以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例,假如要使用DNA合成儀合成亞磷酰胺寡核苷酸,你就得按規(guī)范來(lái):
 
  1、首先對(duì)合成儀上所有試劑瓶中的試劑量認(rèn)真檢查。
  2、然后在合成儀上裝上標(biāo)記好的干凈的收集瓶。在合成儀中輸入要合成的DNA序列。對(duì)選擇的合成步驟進(jìn)行檢查。
  3、選擇結(jié)束方法:儀器的原始狀態(tài)為TritylOffAuto,如果想要通過(guò)5,—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸,那么將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。選擇結(jié)束方法通常是為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
 
  4、將你所希望的保存名字輸入到每個(gè)柱監(jiān)視器的Username下。每一個(gè)收集瓶相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記用代碼代替。將每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料打印出來(lái)。對(duì)打印出來(lái)的資料進(jìn)行檢查,判斷是否正確。
  5、為了確保合成儀上合成柱處于正確的位置,運(yùn)行StartColumn步驟對(duì)每一個(gè)柱的位置進(jìn)行檢查。
  6、對(duì)是否充滿連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)進(jìn)行檢查。
  7、保證試管充分清潔干凈,保證DMT廢液管路通向分部收集器。
  8、將循環(huán)啟動(dòng),運(yùn)行開(kāi)始程序?qū)υ噭┕苈愤M(jìn)行清洗,將原來(lái)的試劑除去。

DNA合成儀

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